王耀东,李生娇,廖建兴
目的: 设计合成干扰葡萄糖转运蛋白1 (glucose transporter 1, GLUT1)基因表达的不同小型干扰 RNA(siRNA),筛选出能高效抑制 GLUT1基因表达的siRNA。方法: 根据人GLUT1 mRNA 的序列,设计合成4对不同的针对GLUT1 的siRNA,应用脂质体 LipofectamineTM 2000转染试剂转染293T细胞制作病毒,将4对siRNA转染人舌鳞癌细胞Cal-27,实时荧光定量PCR (Real-time PCR)技术检测GLUT1 mRNA表达;Western印迹法检测GLUT1蛋白表达;18F-FDG检测GLUT1基因干扰后对Cal-27细胞摄取葡萄糖的影响。结果: 设计合成的 4 对 siRNA中有2对可有效抑制GLUT1的基因表达以及细胞对葡萄糖的摄取。结论: 成功设计合成了针对GLUT1基因的siRNA,并从中筛选出能特异且高效阻断GLUT1表达的siRNA,为进一步应用RNA干扰技术进行GLUT1 基因沉默,从而进行肿瘤的基因治疗奠定了实验基础。